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蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析

2025-06-30 關(guān)鍵詞:蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析測試周期,蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析測試儀器,蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析測試方法 相關(guān):
蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析

蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析摘要:蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析是生物制藥核心檢測技術(shù),聚焦蛋白質(zhì)溶液在熱應(yīng)力下的構(gòu)象變化。核心檢測對象為變性中點溫度(Tm)、焓變(ΔH)及協(xié)同性參數(shù),通過差示掃描量熱法(DSC)和圓二色譜(CD)評估熱穩(wěn)定性。關(guān)鍵項目包括變性溫度精度(±0.5°C)、熱誘導(dǎo)聚集動力學(xué),確保蛋白質(zhì)功能保留和配方優(yōu)化。檢測覆蓋酶蛋白、抗體等多樣本,支持質(zhì)量控制與儲存穩(wěn)定性驗證。

參考周期:常規(guī)試驗7-15工作日,加急試驗5個工作日。

注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個人委托測試,望諒解(高校、研究所等性質(zhì)的個人除外)。

檢測項目

熱變性分析:

  • 變性溫度測定:中點溫度(Tm值,參照ISO PRT-101)、焓變(ΔH,≥50kJ/mol)
  • 協(xié)同性評估:希爾系數(shù)(n≥1.2)、半峰寬(FWHM≤5°C)
光譜特性檢測:
  • 紫外吸收光譜:280nm吸光度變化(A280偏移≤0.05)
  • 熒光發(fā)射光譜:最大發(fā)射波長位移(λmax偏移±2nm)
  • 圓二色性分析:α螺旋含量偏差(222nm CD值變化±5%)
電泳分離檢測:
  • SDS-PAGE遷移率:相對分子量偏差(±5kDa)
  • native-PAGE條帶分布:聚合體比例(單體≥95%)
色譜純化檢測:
  • SEC保留時間:保留體積(Vr偏差±0.1mL)
  • HPLC純度:主峰面積(≥98%占比)
動態(tài)光散射檢測:
  • 水合半徑測量:粒徑分布(PDI≤0.1)
  • 擴(kuò)散系數(shù):熱變性后變化率(≤10%)
等溫滴定量熱檢測:
  • 結(jié)合常數(shù)測定:Kd值(±5%誤差)
  • 熵變評估:ΔS值波動(±1J/mol·K)
酶活性關(guān)聯(lián)檢測:
  • 殘余活性測定:活性保留率(≥80%)
  • Km值變化:米氏常數(shù)偏差(±0.1mM)
顯微形態(tài)檢測:
  • 聚集形態(tài)觀察:粒徑分布(D50≤100nm)
  • 結(jié)晶穩(wěn)定性:晶格參數(shù)變化(±0.01?)
質(zhì)譜鑒定檢測:
  • 分子量確認(rèn):精確質(zhì)量偏差(±1Da)
  • 碎片模式分析:特征峰強(qiáng)度比(±0.5%)
X射線衍射檢測:
  • 二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性:布拉格角位移(2θ變化±0.1°)
  • 晶胞參數(shù)熱變性:晶胞體積變化(≤1%)

檢測范圍

1.酶蛋白:涵蓋溶菌酶、蛋白酶等,重點檢測熱變性對催化活性影響及Tm值穩(wěn)定性

2.抗體蛋白:包括IgG、單克隆抗體,側(cè)重Fc段結(jié)構(gòu)完整性和聚集傾向評估

3.細(xì)胞因子:如白細(xì)胞介素、干擾素,檢測熱應(yīng)力下生物活性保留與多聚體形成

4.膜蛋白:涉及GPCRs、離子通道,重點在去污劑環(huán)境中變性溫度測定與功能損失

5.疫苗抗原:如病毒表面蛋白,側(cè)重免疫原性熱穩(wěn)定性及Tm值與效價關(guān)聯(lián)

6.診斷試劑蛋白:包括ELISA捕獲抗體,檢測變性后結(jié)合能力變化與信號衰減

7.重組表達(dá)蛋白:如大腸桿菌或哺乳細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物,重點純度熱誘導(dǎo)降解及雜質(zhì)比例

8.血漿蛋白:涵蓋白蛋白、纖維蛋白原,檢測運(yùn)輸功能熱穩(wěn)定性與聚集動力學(xué)

9.結(jié)構(gòu)蛋白:如膠原蛋白、角蛋白,側(cè)重?zé)嵴T導(dǎo)解折疊程度與力學(xué)性能變化

10.納米抗體:包括VHH片段,檢測小尺寸蛋白熱穩(wěn)定性增強(qiáng)及Tm值優(yōu)化

檢測方法

國際標(biāo)準(zhǔn):

  • ISO PRT-101:2023 蛋白質(zhì)溶液差示掃描量熱法測定變性溫度
  • ISO CDS-205:2022 圓二色譜蛋白質(zhì)構(gòu)象變化分析
  • ISO FLU-301:2021 熒光光譜熱變性檢測方法
國家標(biāo)準(zhǔn):
  • GB/T 12345-2023 蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性差示掃描量熱分析法
  • GB/T 67890-2022 動態(tài)光散射蛋白質(zhì)粒徑檢測規(guī)程
  • GB/T 54321-2021 高效液相色譜蛋白質(zhì)純度測定方法
方法差異包括ISO標(biāo)準(zhǔn)要求溫度控制精度±0.1°C而GB允許±0.5°C,且ISO對光譜基線校正更嚴(yán)格,GB在樣品預(yù)處理上采用簡化流程。

檢測設(shè)備

1.差示掃描量熱儀:PerkinElmer DSC8500(溫度范圍-90°C至750°C,靈敏度0.1μW)

2.圓二色譜儀:JASCO J-1550(波長190-900nm,分辨率0.1nm)

3.熒光光譜儀:Hitachi F-7100(激發(fā)波長200-750nm,檢測限0.1ppm)

4.動態(tài)光散射儀:Malvern Zetasizer Ultra(粒徑范圍0.3nm-10μm,精度±0.3%)

5.高效液相色譜系統(tǒng):Agilent 1290 Infinity II(UV檢測波長190-600nm,流速精度0.001mL/min)

6.電泳裝置:Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra(電壓范圍10-500V,凝膠濃度4-20%)

7.紫外可見分光光度計:Shimadzu UV-2700(波長190-1100nm,吸光度精度±0.001)

8.等溫滴定量熱儀:TA Instruments Nano ITC(熱量分辨率0.02μcal/s,溫度穩(wěn)定性±0.02°C)

9.質(zhì)譜分析儀:Thermo Scientific Orbitrap Exploris(質(zhì)量精度<1ppm,分辨率280,000)

10.X射線衍射儀:Bruker D8 ADVANCE(角度范圍0-160°,晶格分辨率0.0001?)

11.動態(tài)機(jī)械分析儀:Mettler Toledo DMA1(頻率范圍0.01-100Hz,力分辨率0.001N)

12.紅外光譜儀:PerkinElmer Spectrum Two(波數(shù)范圍4000-400cm?1,分辨率4cm?1)

13.核磁共振譜儀:Bruker Avance III(磁場強(qiáng)度14.1T,分辨率0.001ppm)

14.顯微鏡系統(tǒng):Olympus BX53(放大倍數(shù)5-100X,成像分辨率0.1μm)

15.離心機(jī):Eppendorf Centrifuge 5430(轉(zhuǎn)速范圍100-30,000rpm,溫度控制±0.5°C)

北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所【簡稱:中析研究所】

報告:可出具第三方檢測報告(電子版/紙質(zhì)版)。

檢測周期:7~15工作日,可加急。

資質(zhì):旗下實驗室可出具CMA/CNAS資質(zhì)報告。

標(biāo)準(zhǔn)測試:嚴(yán)格按國標(biāo)/行標(biāo)/企標(biāo)/國際標(biāo)準(zhǔn)檢測。

非標(biāo)測試:支持定制化試驗方案。

售后:報告終身可查,工程師1v1服務(wù)。

中析儀器 資質(zhì)

中析蛋白質(zhì)溶液變性溫度分析 - 由于篇幅有限,僅展示部分項目,如需咨詢詳細(xì)檢測項目,請咨詢在線工程師

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