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蛋白組活性檢測(cè)

2025-07-12 關(guān)鍵詞:蛋白組活性測(cè)試案例,蛋白組活性測(cè)試周期,蛋白組活性測(cè)試標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān):
蛋白組活性檢測(cè)

蛋白組活性檢測(cè)摘要:蛋白組活性檢測(cè)專(zhuān)注于量化生物樣本中蛋白質(zhì)的功能活性狀態(tài),核心檢測(cè)對(duì)象包括酶催化效率、受體配體結(jié)合親和力及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。關(guān)鍵項(xiàng)目涉及活性單位測(cè)定(如kcat值)、半數(shù)抑制濃度(IC50)、構(gòu)象穩(wěn)定性參數(shù)及修飾依賴(lài)性活性變化。檢測(cè)方法涵蓋酶動(dòng)力學(xué)分析、表面等離子共振技術(shù)和熒光偏振法,適用于藥物篩選、疾病診斷和生物制品質(zhì)量控制,確保數(shù)據(jù)精度通過(guò)ISO及GB標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證。

參考周期:常規(guī)試驗(yàn)7-15工作日,加急試驗(yàn)5個(gè)工作日。

注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試,望諒解(高校、研究所等性質(zhì)的個(gè)人除外)。

檢測(cè)項(xiàng)目

酶活性檢測(cè):

  • 催化效率測(cè)定:kcat值(單位s?1)、米氏常數(shù)(Km,單位μM)(參照ISO 18153)
  • 抑制活性分析:半數(shù)抑制濃度(IC50,單位nM)、抑制類(lèi)型分類(lèi)
  • 酶動(dòng)力學(xué)參數(shù):最大反應(yīng)速率(Vmax,單位μmol/min)、轉(zhuǎn)換數(shù)(kcat/Km)
受體結(jié)合活性檢測(cè):
  • 親和力測(cè)定:結(jié)合常數(shù)(Kd,單位nM)、解離常數(shù)(koff,單位s?1)
  • 特異性分析:交叉反應(yīng)率(≤5%)、飽和結(jié)合曲線(xiàn)
  • 配體競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn):半數(shù)有效濃度(EC50,單位μM)
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性檢測(cè):
  • 磷酸化水平:磷酸化位點(diǎn)豐度(相對(duì)單位)、激酶活性(單位pmol/min)
  • 信號(hào)通路激活:下游效應(yīng)物濃度變化(倍數(shù)差異≥2)、時(shí)間動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)
  • G蛋白偶聯(lián)受體活性:cAMP生成量(單位pmol)、β-arrestin招募率
蛋白質(zhì)折疊檢測(cè):
  • 構(gòu)象穩(wěn)定性:熔解溫度(Tm,單位°C)、自由能變化(ΔG,單位kJ/mol)
  • 聚集傾向分析:濁度值(NTU)、粒徑分布(D90≤100nm)
  • 二硫鍵完整性:還原型/氧化型比例(≥90%)
蛋白質(zhì)降解檢測(cè):
  • 蛋白酶解速率:半衰期(t1/2,單位h)、降解產(chǎn)物豐度
  • 泛素化水平:泛素鏈長(zhǎng)度(Ub2-Ub7)、去泛素化酶活性
  • 自噬相關(guān)活性:LC3-II/LC3-I比值(≥1.5)、p62降解率
蛋白質(zhì)修飾檢測(cè):
  • 磷酸化修飾:磷酸化位點(diǎn)鑒定、修飾程度(摩爾比)
  • 糖基化分析:糖型分布(主要糖型占比≥80%)、糖基化位點(diǎn)
  • 乙?;瘷z測(cè):乙?;剑ㄏ鄬?duì)豐度)、去乙酰化酶抑制率
蛋白質(zhì)相互作用檢測(cè):
  • 結(jié)合強(qiáng)度:結(jié)合常數(shù)(Kd,單位nM)、協(xié)同因子效應(yīng)
  • 復(fù)合物形成:復(fù)合物穩(wěn)定性(半衰期≥30min)、結(jié)合位點(diǎn)映射
  • 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn):抑制常數(shù)(Ki,單位μM)、選擇性指數(shù)
酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)檢測(cè):
  • 米氏方程擬合:Vmax值(單位μmol/min)、Km值(單位μM)
  • 抑制動(dòng)力學(xué):抑制常數(shù)(Ki,單位nM)、抑制模式分類(lèi)
  • 激活劑效應(yīng):激活常數(shù)(Ka,單位μM)、最大激活率
抗體活性檢測(cè):
  • 結(jié)合親和力:Kd值(單位pM)、效價(jià)(滴度≥1:1000)
  • 中和活性:中和抗體滴度(單位IU/mL)、半數(shù)中和濃度(ND50)
  • Fc功能檢測(cè):ADCC活性(裂解率≥50%)、CDC效價(jià)
蛋白質(zhì)穩(wěn)定性檢測(cè):
  • 熱穩(wěn)定性:Tm值(單位°C)、變性焓變(ΔH)
  • 化學(xué)穩(wěn)定性:變性劑中點(diǎn)濃度(Cm,單位M)、pH穩(wěn)定性范圍
  • 凍融穩(wěn)定性:活性保留率(≥95%)、聚集顆粒數(shù)

檢測(cè)范圍

1. 血清樣本: 包括人血清和動(dòng)物血清,檢測(cè)重點(diǎn)為炎癥標(biāo)志物活性(如C反應(yīng)蛋白酶活性)及抗體中和能力。

2. 細(xì)胞裂解液: 涵蓋腫瘤細(xì)胞和干細(xì)胞裂解物,重點(diǎn)檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活狀態(tài)及激酶磷酸化水平。

3. 組織勻漿: 涉及肝臟和腦組織樣本,檢測(cè)重點(diǎn)為代謝酶活性變化及蛋白質(zhì)降解速率。

4. 重組蛋白制劑: 包括表達(dá)純化的酶和受體,重點(diǎn)檢測(cè)催化效率、結(jié)合親和力及構(gòu)象穩(wěn)定性。

5. 酶制品: 涵蓋工業(yè)酶和診斷酶,檢測(cè)重點(diǎn)為比活性(單位U/mg)及抑制劑敏感性。

6. 抗體藥物: 包括單克隆抗體和雙特異性抗體,重點(diǎn)檢測(cè)抗原結(jié)合活性、Fc效應(yīng)功能及穩(wěn)定性。

7. 疫苗樣品: 涉及病毒載體和亞單位疫苗,檢測(cè)重點(diǎn)為抗原免疫原性及佐劑增強(qiáng)的酶活性。

8. 生物制品: 包括細(xì)胞治療產(chǎn)品和基因療法制劑,重點(diǎn)檢測(cè)蛋白質(zhì)修飾依賴(lài)活性及降解產(chǎn)物。

9. 食品蛋白提取物: 涵蓋乳制品和植物蛋白,檢測(cè)重點(diǎn)為消化酶抗性及過(guò)敏原活性。

10. 環(huán)境樣品中的蛋白質(zhì): 包括水體和土壤提取物,重點(diǎn)檢測(cè)微生物酶活性及污染物結(jié)合能力。

檢測(cè)方法

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn):

  • ISO 18153:2003 體外診斷醫(yī)療器具酶活性測(cè)量方法
  • ASTM E2520-15 蛋白質(zhì)結(jié)合活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)指南
  • ISO 10993-18:2020 生物材料中蛋白質(zhì)修飾檢測(cè)
  • ASTM E2867-14 酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):
  • GB/T 16886.18-2011 醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)吸附試驗(yàn)
  • GB/T 5009.124-2016 食品中蛋白質(zhì)活性測(cè)定方法
  • GB/T 30975-2014 生物制品中抗體活性檢測(cè)
  • GB/T 35430-2017 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性試驗(yàn)方法
方法差異說(shuō)明:ISO標(biāo)準(zhǔn)側(cè)重酶活性單位校準(zhǔn),ASTM強(qiáng)調(diào)結(jié)合動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)擬合;GB標(biāo)準(zhǔn)在樣品前處理要求更嚴(yán)格,如緩沖液pH控制差異。

檢測(cè)設(shè)備

1. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì): Shimadzu UV-2600i(波長(zhǎng)范圍190-1100nm,分辨率0.1nm)

2. 熒光光譜儀: Horiba Fluoromax-4(激發(fā)波長(zhǎng)200-800nm,檢測(cè)限0.1nM)

3. 高效液相色譜儀: Agilent 1260 Infinity II(流速范圍0.001-10mL/min,壓力上限600bar)

4. 質(zhì)譜儀: Thermo Q Exactive HF-X(質(zhì)量精度<1ppm,分辨率140000)

5. 酶標(biāo)儀: BioTek Synergy H1(檢測(cè)模式多,包括熒光和發(fā)光,孔板兼容1536孔)

6. 圓二色光譜儀: Jasco J-1500(波長(zhǎng)范圍185-2600nm,溫度控制±0.1°C)

7. 表面等離子共振儀: Biacore 8K(流速范圍1-100μL/min,檢測(cè)限0.1RU)

8. 等溫滴定量熱儀: MicroCal PEAQ-ITC(溫度范圍2-80°C,靈敏度0.1μcal/s)

9. 動(dòng)態(tài)光散射儀: Malvern Zetasizer Pro(粒徑范圍0.3nm-10μm,溫度精度±0.1°C)

10. 核磁共振譜儀: Bruker Avance NEO 600MHz(場(chǎng)強(qiáng)14.1T,探頭靈敏度高)

11. 電化學(xué)工作站: CHI760E(電流范圍±250mA,掃描速率0.001-1000V/s)

12. 蛋白純化系統(tǒng): AKTA pure 25(流速范圍0.001-25mL/min,UV檢測(cè)波長(zhǎng)254nm)

13. 生物反應(yīng)器: Sartorius Biostat B(控制參數(shù)pH、DO、溫度,容量1-10L)

14. 流式細(xì)胞儀: BD FACSAria III(激光配置488nm、640nm,分選速率70000事件/秒)

15. 微量熱泳動(dòng)儀: NanoTemper Monolith(溫度范圍4-40°C,檢測(cè)限1nM)

北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所【簡(jiǎn)稱(chēng):中析研究所】

報(bào)告:可出具第三方檢測(cè)報(bào)告(電子版/紙質(zhì)版)。

檢測(cè)周期:7~15工作日,可加急。

資質(zhì):旗下實(shí)驗(yàn)室可出具CMA/CNAS資質(zhì)報(bào)告。

標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試:嚴(yán)格按國(guó)標(biāo)/行標(biāo)/企標(biāo)/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)。

非標(biāo)測(cè)試:支持定制化試驗(yàn)方案。

售后:報(bào)告終身可查,工程師1v1服務(wù)。

中析儀器 資質(zhì)

中析蛋白組活性檢測(cè) - 由于篇幅有限,僅展示部分項(xiàng)目,如需咨詢(xún)?cè)敿?xì)檢測(cè)項(xiàng)目,請(qǐng)咨詢(xún)?cè)诰€(xiàn)工程師

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