200nt片段占比)、OD260/280比值(純度指示)和降解產(chǎn)物分析,確保樣本適用于下游應(yīng)用如RT-qPCR和RNA測序,基于電泳和光譜法實(shí)現(xiàn)量化評估。" />

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RNA完整性測試

2025-07-13 關(guān)鍵詞:RNA完整性測試測試儀器,RNA完整性測試測試標(biāo)準(zhǔn),RNA完整性測試測試周期 相關(guān):
RNA完整性測試

RNA完整性測試摘要:RNA完整性測試是分子生物學(xué)中評估RNA樣本質(zhì)量的核心技術(shù),聚焦RNA分子的完整性、純度和降解程度。關(guān)鍵檢測項(xiàng)目包括RNA完整性指數(shù)(RIN值,范圍1-10)、DV200(>200nt片段占比)、OD260/280比值(純度指示)和降解產(chǎn)物分析,確保樣本適用于下游應(yīng)用如RT-qPCR和RNA測序,基于電泳和光譜法實(shí)現(xiàn)量化評估。

參考周期:常規(guī)試驗(yàn)7-15工作日,加急試驗(yàn)5個(gè)工作日。

注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測試,望諒解(高校、研究所等性質(zhì)的個(gè)人除外)。

檢測項(xiàng)目

完整性指標(biāo):

  • RIN值:范圍1-10(參照Agilent2100方法)
  • DV200:百分比值(≥50%視為完整)
  • 28S/18S比值:目標(biāo)≥1.5(參照RNA完整性標(biāo)準(zhǔn))
純度檢測:
  • OD260/280比值:1.8-2.0(紫外分光光度法)
  • OD260/230比值:≥1.8(評估有機(jī)雜質(zhì))
  • 核酸污染檢測:DNA殘留≤5%(qPCR驗(yàn)證)
濃度測定:
  • RNA濃度:ng/μl值(Qubit熒光法)
  • 總RNA量:μg范圍(NanoDrop測量)
  • 稀釋因子計(jì)算:基于濃度調(diào)整(標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范)
降解評估:
  • 降解指數(shù):DI值≤2.0(電泳圖譜分析)
  • 小片段百分比:<200nt片段≤20%(微流控芯片法)
  • 半衰期測試:t1/2≥4小時(shí)(降解動力學(xué)模型)
片段分布分析:
  • 片段大小分布:峰圖量化(Bioanalyzer軟件)
  • 主峰位置:>500nt峰值(毛細(xì)管電泳)
  • 多分散性指數(shù):PDI≤0.3(動態(tài)光散射法)
雜質(zhì)檢測:
  • 蛋白殘留:A280值≤0.2(BCA測定法)
  • 鹽分含量:鈉離子≤10mM(離子色譜法)
  • 酚污染檢測:吸光度≤0.05(特定波長掃描)
穩(wěn)定性測試:
  • 凍融穩(wěn)定性:RIN變化率≤5%(-80°C存儲)
  • 室溫穩(wěn)定性:降解速率≤1%/小時(shí)(實(shí)時(shí)監(jiān)測)
  • RNase活性:陰性結(jié)果(酶聯(lián)免疫法)
定量分析:
  • 絕對定量:拷貝數(shù)/μl(數(shù)字PCR方法)
  • 相對定量:Ct值差異≤1(RT-qPCR驗(yàn)證)
  • 批次一致性:RSD≤10%(統(tǒng)計(jì)控制)
功能驗(yàn)證:
  • 反轉(zhuǎn)錄效率:≥90%(cDNA產(chǎn)量測試)
  • 擴(kuò)增效率:90%-110%(qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線)
  • 文庫構(gòu)建成功率:≥95%(NGS適配)
其他指標(biāo):
  • pH值檢測:7.0-8.0(電極法)
  • 滲透壓:280-320mOsm(滲透壓計(jì))
  • 微生物污染:無菌測試(培養(yǎng)法)

檢測范圍

1.細(xì)胞總RNA:來源于哺乳動物或昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)物,重點(diǎn)檢測降解程度和純度,確保無細(xì)胞碎片干擾。

2.組織RNA:取自動物或植物新鮮/冰凍組織,側(cè)重片段大小分布和雜質(zhì)殘留,適用于病理研究。

3.血液RNA:全血或血清樣本,檢測重點(diǎn)為低濃度RNA的完整性指標(biāo)和溶血影響評估。

4.植物RNA:葉、根等植物材料,強(qiáng)調(diào)多糖多酚雜質(zhì)去除和DV200值驗(yàn)證。

5.微生物RNA:細(xì)菌、真菌或病毒來源,專注快速降解預(yù)防和OD比值準(zhǔn)確性。

6.FFPE樣本RNA:福爾馬林固定石蠟包埋組織,核心檢測高度降解片段和小RNA占比。

7.體外轉(zhuǎn)錄RNA:合成RNA產(chǎn)品,驗(yàn)證濃度均勻性和無DNase污染。

8.小RNA:miRNA或siRNA樣本,檢測重點(diǎn)為<200nt片段純度和定量精度。

9.mRNA:多聚腺苷酸純化產(chǎn)物,側(cè)重完整性指標(biāo)和反轉(zhuǎn)錄適用性測試。

10.rRNA:核糖體RNA富集樣本,評估28S/18S比值和穩(wěn)定性。

檢測方法

國際標(biāo)準(zhǔn):

  • ISO20395:2019生物樣本RNA完整性測試方法
  • ASTME3135-18RNA降解評估標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程
  • IEC62304醫(yī)療設(shè)備軟件相關(guān)RNA驗(yàn)證
國家標(biāo)準(zhǔn):
  • GB/T37871-2019RNA完整性檢測通用要求
  • GB/T34796-2017核酸純度分光光度法
  • GB/T35538-2017分子生物學(xué)樣本處理規(guī)范
方法差異說明:國際標(biāo)準(zhǔn)側(cè)重電泳量化參數(shù)(如RIN計(jì)算),國家標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)熒光法和預(yù)處理步驟差異(如樣本稀釋比例);GB/T34796與ISO20395在OD比值閾值上存在±0.1偏差。

檢測設(shè)備

1.生物分析儀:Agilent2100Bioanalyzer(分辨率1-10000nt,芯片容量12樣本)

2.熒光分光光度計(jì):ThermoNanoDrop2000(波長范圍190-840nm,檢測限1ng/μl)

3.微流控芯片系統(tǒng):Bio-RadExperion(自動化電泳,通量96樣本/小時(shí))

4.Qubit熒光計(jì):InvitrogenQubit4.0(動態(tài)范圍0.1-1000ng,精度±5%)

5.毛細(xì)管電泳儀:BeckmanCoulterPA800(電場強(qiáng)度300V/cm,分離時(shí)間30分鐘)

6.紫外分光光度計(jì):ShimadzuUV-2600(雙光束設(shè)計(jì),吸光度精度0.001)

7.PCR儀:AppliedBiosystems7500(溫度均一性±0.3°C,96孔板兼容)

8.數(shù)字PCR系統(tǒng):Bio-RadQX200(分區(qū)數(shù)20000,絕對定量能力)

9.動態(tài)光散射儀:MalvernZetasizerNano(粒徑范圍0.3nm-10μm,PDI計(jì)算)

10.離子色譜儀:ThermoICS-5000+(檢測限0.1ppb,流速0.1-5ml/min)

11.酶標(biāo)儀:PerkinElmerEnVision(波長掃描190-900nm,通量384孔)

12.滲透壓計(jì):AdvancedInstrumentsOsmomat3000(范圍0-2000mOsm,精度±1%)

13.電化學(xué)工作站:CHI760E(電位范圍±10V,阻抗測量)

14.無菌培養(yǎng)箱:MemmertINCO(溫度控制±0.1°C,CO2調(diào)節(jié))

15.實(shí)時(shí)溫度監(jiān)測器:VaisalaLoggingSystem(溫度范圍-80°C至150°C,數(shù)據(jù)記錄)

北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所【簡稱:中析研究所】

報(bào)告:可出具第三方檢測報(bào)告(電子版/紙質(zhì)版)。

檢測周期:7~15工作日,可加急。

資質(zhì):旗下實(shí)驗(yàn)室可出具CMA/CNAS資質(zhì)報(bào)告。

標(biāo)準(zhǔn)測試:嚴(yán)格按國標(biāo)/行標(biāo)/企標(biāo)/國際標(biāo)準(zhǔn)檢測。

非標(biāo)測試:支持定制化試驗(yàn)方案。

售后:報(bào)告終身可查,工程師1v1服務(wù)。

中析儀器 資質(zhì)

中析RNA完整性測試 - 由于篇幅有限,僅展示部分項(xiàng)目,如需咨詢詳細(xì)檢測項(xiàng)目,請咨詢在線工程師

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