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谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn)

2025-07-28 關(guān)鍵詞:谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn),中析研究所,CMA/CNAS資質(zhì),北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所 相關(guān):
谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn)

谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn)摘要:谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn)是一種測(cè)定谷胱甘肽還原酶(GR)酶活性的生化檢測(cè)方法,核心檢測(cè)對(duì)象為GR催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)還原為還原型谷胱甘肽(GSH)的效率,關(guān)鍵項(xiàng)目包括酶活性單位(基于NADPH消耗速率)、動(dòng)力學(xué)參數(shù)(如Km和Vmax值)、溫度及pH依賴性(優(yōu)化范圍為25-37℃,pH 7.0-7.6),以及抑制劑效應(yīng)評(píng)估(如BCNU影響)。該方法廣泛應(yīng)用于氧化應(yīng)激監(jiān)測(cè)、藥物毒理學(xué)研究及生物樣本質(zhì)量評(píng)價(jià),需確保反應(yīng)特異性(如空白對(duì)照排除干擾)和線性范圍驗(yàn)證(標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99)。

參考周期:常規(guī)試驗(yàn)7-15工作日,加急試驗(yàn)5個(gè)工作日。

注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試,望諒解(高校、研究所等性質(zhì)的個(gè)人除外)。

檢測(cè)項(xiàng)目

酶活性測(cè)定:

  • 基礎(chǔ)活性:NADPH消耗速率(單位:U/mg蛋白,參照ISO10993-10)、反應(yīng)線性范圍(R2≥0.98)
  • 特異性驗(yàn)證:空白對(duì)照吸光度偏差(≤0.005OD)
動(dòng)力學(xué)參數(shù)分析:
  • 米氏常數(shù):Km值(針對(duì)GSSG底物,范圍0.05-0.2mM)
  • 最大反應(yīng)速率:Vmax值(單位:μmol/min/mg)
溫度依賴性測(cè)試:
  • 最適溫度:活性峰值溫度(25-37℃)
  • 熱穩(wěn)定性:半衰期(t1/2≥30minat40℃)
pH依賴性評(píng)估:
  • 最適pH:峰值pH值(7.0-7.6)
  • 緩沖液兼容性:活性保留率(≥95%inPBS)
抑制劑篩選:
  • 抑制效應(yīng):IC50值(針對(duì)BCNU等抑制劑)
  • 選擇性測(cè)試:交叉反應(yīng)性(≤5%)
穩(wěn)定性測(cè)試:
  • 凍融穩(wěn)定性:活性損失率(≤10%after3cycles)
  • 長(zhǎng)期儲(chǔ)存:-80℃保存活性(≥90%after6months)
純度分析:
  • 雜質(zhì)檢測(cè):非特異性酶活性(≤2%)
  • 蛋白濃度:Bradford法測(cè)定(偏差±5%)
生物樣本適用性:
  • 回收率測(cè)試:加標(biāo)回收率(95-105%)
  • 基質(zhì)效應(yīng):活性抑制率(≤10%)
標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證:
  • 線性度:相關(guān)系數(shù)(R2≥0.99)
  • 檢測(cè)限:LOD值(≤0.01U/mL)
質(zhì)量控制:
  • 批內(nèi)精密度:RSD≤5%
  • 批間精密度:RSD≤8%

檢測(cè)范圍

1.人體血液樣本:血清或血漿中GR活性測(cè)定,重點(diǎn)監(jiān)測(cè)氧化應(yīng)激生物標(biāo)志物變化及疾病關(guān)聯(lián)性

2.動(dòng)物組織裂解液:肝、腎等器官樣本,側(cè)重酶活性分布及毒理學(xué)影響評(píng)估

3.細(xì)胞培養(yǎng)物:細(xì)胞裂解液(如HepG2細(xì)胞),關(guān)注藥物處理后的酶活性響應(yīng)

4.植物提取物:葉片或根莖樣本,重點(diǎn)分析抗氧化能力與環(huán)境脅迫關(guān)聯(lián)

5.微生物培養(yǎng)液:細(xì)菌或酵母發(fā)酵液,檢測(cè)GR活性在代謝工程中的應(yīng)用

6.臨床診斷樣本:尿液或唾液,用于非侵入式氧化狀態(tài)監(jiān)測(cè)

7.生物藥劑:重組蛋白制劑,驗(yàn)證生產(chǎn)過(guò)程中酶活性的穩(wěn)定性

8.食品添加劑:抗氧化劑樣品,評(píng)估其對(duì)GR活性的調(diào)控效應(yīng)

9.環(huán)境污染物樣本:水體或土壤提取物,重點(diǎn)檢測(cè)重金屬對(duì)酶活性的抑制

10.藥物代謝產(chǎn)物:體外代謝反應(yīng)液,分析藥物-酶相互作用動(dòng)力學(xué)

檢測(cè)方法

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn):

  • ISO10993-10:2021醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)-酶活性測(cè)定
  • ASTME2523-13生化酶動(dòng)力學(xué)測(cè)試方法
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):
  • GB/T16886.10-2017醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第10部分:刺激與致敏試驗(yàn)
  • GB/T5009.170-2022食品中抗氧化酶活性測(cè)定
(方法差異:國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)采用高靈敏度分光法,要求檢測(cè)波長(zhǎng)340nm;國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)側(cè)重樣本前處理,規(guī)定緩沖液pH7.4)

檢測(cè)設(shè)備

1.紫外可見分光光度計(jì):ShimadzuUV-1800(波長(zhǎng)范圍190-1100nm,分辨率0.1nm)

2.恒溫水浴槽:JulaboF32(控溫精度±0.1℃,范圍0-100℃)

3.高速離心機(jī):Eppendorf5425R(最大轉(zhuǎn)速15000rpm,溫度控制4-40℃)

4.微量移液器:BrandTransferpette(量程0.1-1000μL,精度±0.5%)

5.酶標(biāo)儀:BioTekSynergyH1(檢測(cè)模式:熒光/吸光度,波長(zhǎng)范圍200-999nm)

6.恒溫振蕩器:IKAKS4000(轉(zhuǎn)速50-400rpm,溫度一致性±0.5℃)

7.冷凍離心機(jī):ThermoScientificSorvallLYNX6000(溫度范圍-20℃至40℃,最大容量6x1000mL)

8.pH計(jì):MettlerToledoSevenExcellence(測(cè)量范圍0-14,精度±0.01)

9.超低溫冰箱:HaierDW-86L388(溫度范圍-86℃,均勻性±3℃)

10.渦旋混合器:IKAMS3(轉(zhuǎn)速100-3000rpm,定時(shí)功能0-60min)

11.蛋白濃度測(cè)定儀:NanoDropOne(檢測(cè)限0.002mg/mL,波長(zhǎng)280nm)

12.恒溫培養(yǎng)箱:MemmertIN110(溫度范圍5-70℃,穩(wěn)定性±0.3℃)

13.電子天平:SartoriusCPA225D(量程0.001g-220g,精度0.1mg)

14.樣品研磨器:RetschMM400(頻率30Hz,研磨時(shí)間1-15min)

15.真空濃縮儀:EppendorfConcentratorPlus(溫度范圍30-70℃,真空度<50mbar)

北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所【簡(jiǎn)稱:中析研究所】

報(bào)告:可出具第三方檢測(cè)報(bào)告(電子版/紙質(zhì)版)。

檢測(cè)周期:7~15工作日,可加急。

資質(zhì):旗下實(shí)驗(yàn)室可出具CMA/CNAS資質(zhì)報(bào)告。

標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試:嚴(yán)格按國(guó)標(biāo)/行標(biāo)/企標(biāo)/國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)。

非標(biāo)測(cè)試:支持定制化試驗(yàn)方案。

售后:報(bào)告終身可查,工程師1v1服務(wù)。

中析儀器 資質(zhì)

中析谷胱甘肽還原酶活性試驗(yàn) - 由于篇幅有限,僅展示部分項(xiàng)目,如需咨詢?cè)敿?xì)檢測(cè)項(xiàng)目,請(qǐng)咨詢?cè)诰€工程師

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